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中科院院士組文章解析蛋白合成機(jī)制
更新時(shí)間:2013-01-09   點(diǎn)擊次數(shù):1521次

 來(lái)自中科院上海生化與細(xì)胞所的研究人員利用一種新研究體系:結(jié)核分支桿菌亮氨酰-tRNA合成酶(MtbLeuRS) ,發(fā)現(xiàn)了原核病原菌亮氨酰-tRNA合成酶的C-端延伸結(jié)構(gòu)域在維持酶與核酸相互作用方面的重要機(jī)制,相關(guān)成果公布在Nucleic Acids Research雜志上。

  這項(xiàng)研究由王恩多研究組完成,*作者為胡慶華博士。王恩多院士長(zhǎng)期從事酶學(xué)和酶與核酸的相互作用的研究,在蛋白質(zhì)生物合成中關(guān)鍵的氨基酰 -tRNA合成酶與tRNA相互作用的研究中做出了重要貢獻(xiàn),于2005年當(dāng)選為中國(guó)科學(xué)院院士。2006年當(dāng)選為第三世界科學(xué)院院士。

  肺結(jié)核(tuberculosis, TB)是威脅*人類(lèi)健康的重大傳染性疾病。截至2009年底WHO的統(tǒng)計(jì)報(bào)告顯示,約有1/3的人口感染結(jié)核分支桿菌(Mycobacterium tuberculosis)——肺結(jié)核的主要致病菌。當(dāng)前,耐多藥結(jié)核桿菌的蔓延(multi-drug resistant TB, MDR-TB)對(duì)臨床抗生素療法提出了挑戰(zhàn),迫切需要開(kāi)發(fā)新型抗生素。

  細(xì)菌中基因的表達(dá)調(diào)控過(guò)程一直是藥物人員尋找靶點(diǎn)的途徑。近年來(lái),在蛋白質(zhì)合成起始發(fā)揮作用的氨基酰-tRNA合成酶(aaRS)以其*的優(yōu)勢(shì)成為抗生素新藥開(kāi)發(fā)的一個(gè)理想靶點(diǎn)。

  首先,aaRS普遍存在于自然界有細(xì)胞的生命體內(nèi),維持了細(xì)胞的基本生命活動(dòng),其功能的缺失將影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。其次,不同物種來(lái)源的aaRS在結(jié)構(gòu)和分子催化機(jī)制上的差異,為開(kāi)發(fā)具有選擇性的藥物提供了可能。再次,多達(dá)20種的aaRS增加了藥物靶點(diǎn)的選擇性。此外,在臨床外傷感染有近30年應(yīng)用史的細(xì)菌異亮氨酰-tRNA合成酶抑制劑——莫匹羅星(商品名百多邦),以及進(jìn)入臨床III期試驗(yàn)將用于灰指甲治療的亮氨酰-tRNA合成酶抑制劑——5- 氟-1,3-二氫-1-羥基-2,1-苯并硼烷(AN2690), 更為以aaRS為靶點(diǎn)的抗生素增添了信心。

  在這篇文章中,研究人員用建立的結(jié)核分支桿菌亮氨酰-tRNA合成酶(MtbLeuRS) 的研究體系圍繞C-端延伸結(jié)構(gòu)域(CTD)開(kāi)展了一系列的工作,他們利用大腸桿菌基因表達(dá)體系獲得了高活力的MtbLeuRS和結(jié)核桿菌亮氨酸 tRNA(Mtb-tRNALeu),建立了一個(gè)的MtbLeuRS/Mtb-tRNALeu研究體系,并通過(guò)定量分析MtbLeuRS的編校反應(yīng),發(fā)現(xiàn)它編校正纈氨酸(Nva)偏好依賴(lài)tRNA的轉(zhuǎn)移前編校途徑,占總編校反應(yīng)的70%, 是已報(bào)道的LeuRS中zui高的。

  并且研究人員鑒定出對(duì)維持酶構(gòu)象及酶與核酸相互作用的關(guān)鍵氨基酸殘基,借助熒光滴定和酵母三雜交手段發(fā)現(xiàn)這些位點(diǎn)的突變都會(huì)影響酶與tRNA的結(jié)合。研究人員還從立體結(jié)構(gòu)分析了CTD與酶的主體部分的連接肽段的柔性與酶活力的關(guān)系,揭示了CTD的靈活性在調(diào)節(jié)底物結(jié)合、氨基?;熬幮7磻?yīng)中酶與 tRNA的相互作用的重要性,鑒定出調(diào)節(jié)構(gòu)象的至關(guān)重要的一個(gè)位點(diǎn)。

  這項(xiàng)研究豐富了人們對(duì)酶與tRNA的識(shí)別質(zhì)量控制蛋白質(zhì)合成*步反應(yīng)的認(rèn)識(shí),同時(shí)建立的MtbLeuRS/Mtb-tRNALeu研究系統(tǒng)也為篩選抗結(jié)核病新藥提供了研究平臺(tái)。

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