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腺病毒D型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒?實(shí)驗(yàn)操作
更新時(shí)間:2022-03-29   點(diǎn)擊次數(shù):761次

腺病毒D型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒實(shí)驗(yàn)操作:

1. 模板制備(樣本制備區(qū))

建議使用配套水生動(dòng)物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產(chǎn)品,具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。

2.添加模板(模板添加區(qū),放置于冰盒中進(jìn)行)

請(qǐng)于-20℃條件下保存,有效期 12 個(gè)月

取出所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液 A-TSV-I 的 PCR 管,將試劑*解凍,離心 30 秒,在管蓋上標(biāo)記管名(陰性對(duì)照管 NG、樣品 XX、陽(yáng)性對(duì)照管 PG)。打開(kāi)管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I,蓋上陰性對(duì)照管管蓋,其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板,順序?yàn)榇郎y(cè)樣品模板、PG-TSV-I,依次蓋好各管管蓋,離心 30 秒,立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

3. 擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū))

①恒溫儀器 63℃條件下反應(yīng) 60 min。待儀器升溫至 63℃后,新建程序,設(shè)置實(shí)驗(yàn)名稱及反應(yīng)時(shí)間,將步驟 2中離心后的 PCR 反應(yīng)管放入恒溫?zé)晒夥肿訖z測(cè)儀,點(diǎn)擊開(kāi)始檢測(cè)。

②若使用熒光定量 PCR 儀,則熒光基團(tuán)選擇 FAM,淬滅基團(tuán)選擇 None,將 63℃ 15 s,63℃ 45 s 作為一個(gè)循環(huán),于 63℃ 45 s 處收集熒光信號(hào),60 個(gè)循環(huán)。其他儀器請(qǐng)參照儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行設(shè)置。

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