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乙醛脫氫酶(ALDH)操作步驟
更新時間:2021-07-07   點擊次數(shù):2050次

乙醛脫氫酶(ALDH)操作步驟:
1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

2,4-D 10g/100g/250g原裝
(2,4-二氯苯氧乙酸)
2,6-Dichlorophenolindophenol, 1g/5g/25g原裝
(氯靛酚鈉)
2’-Deoxy-D-Glucose 100mg/1g原裝/5g原裝
(2-脫氧-D-葡萄糖)
2’-Deoxy-D-Ribose 1g原裝/5g原裝/10g原裝
(2-脫氧-D-核糖)
20XSSC溶液 100ml
(20XSSC溶液)
2-Thiobarbituricacid 10g/50g/100g原裝
(2-硫代巴比妥酸)
3#Bilesalt 25g/1kg
(三號膽鹽)
3-AT 5g/10g/25g/100g原裝
4-Chloro-1-Naphthol 5g/10g/25g/50g原裝
(4-氯-1-萘酚)
4-Methylumbelliferone 5g/10g/25g/100g原裝
(4-甲基傘形酮)
5-Bromo-2'-Deoxyuridine 250mg/1g
(5-溴-2-脫氧尿苷)
6-(γ,γ-Dimethylallylamino) 25mg 原裝
purineriboside(嘌呤核苷)
 

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